一．產(chǎn)品簡介
2、生長特性：貼壁
3、細胞生長條件：
培養(yǎng)條件 DMEM(高糖）+10%FBS+1%雙抗
溫度 37℃
空氣條件 5% CO2，,95% AIR
傳代方法 1:2 傳代，2~3 天換液
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
4、背景資料：從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞。這些細胞用腺病毒 12-SV40 病毒雜交病毒感染并克隆。DEAS-2B 細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力，并有用于篩選誘導或影響分化及致癌的化學或生物制劑。細胞角蛋白及 SV40 抗原染色陽性。
二．使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2
細胞培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用
PBS 清洗細胞一次；2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 12ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳
代，最后放入 37℃，5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用
PBS 清洗細胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待
細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將
懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)
入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃
水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm
離心 5min；
3）棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2
細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
