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人肺鱗癌細胞(NCI-H226)

細胞介紹:人肺鱗癌細胞(NCI-H2261980年由AF Gazdar, JD Minna分離建立。

人肺鱗癌細胞(NCI-H226特性:

1) 來源:肺癌

2) 形態(tài):上皮細胞樣

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式:

1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細

細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途:僅供科研使用。

細胞培養(yǎng)步驟:

一.人肺鱗癌細胞(NCI-H226培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二.細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?span lang="EN-US">細胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4 鐘,棄去上清液,補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按12 13 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO 后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM 條件下離心4 分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO 后進行凍存。

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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