1.細(xì)胞：無(wú)論你是培養(yǎng)那種細(xì)胞，來(lái)源很重要，一般自己花錢從ATCC買來(lái)的就不用說(shuō)了。若是別人“惠贈(zèng)”，一定要請(qǐng)別人惠贈(zèng)代數(shù)早一些的，狀態(tài)好一些的，有些細(xì)胞拿來(lái)時(shí)狀態(tài)就很差，還有小黑點(diǎn)，不是迫不得已最好別用了。若細(xì)胞是自己取材，千萬(wàn)注意無(wú)菌操作，取出的細(xì)胞可以用含高濃度抗生素的培養(yǎng)基洗一下，再換用實(shí)際所需的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)基：DMEM主要用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，1640一般用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。對(duì)常規(guī)細(xì)胞我們實(shí)驗(yàn)室一直按照這個(gè)原則，除非有特殊要求。但是有時(shí)候?qū)?/span>DMEM和1640各50%或按照一定比例混合，也可以達(dá)到很好的培養(yǎng)效果，原因是兩種培養(yǎng)基中的成分會(huì)互補(bǔ)，對(duì)一些細(xì)胞會(huì)有幫助，尤其是剛復(fù)蘇出來(lái)狀態(tài)很差的細(xì)胞。

3.血清：若細(xì)胞珍貴，實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)較足，一定使用進(jìn)口，我們的經(jīng)驗(yàn)是Gibico和hyclone的很好，對(duì)血清非常敏感的細(xì)胞我們首選Gibco。進(jìn)口血清除非作細(xì)胞因子等免疫學(xué)檢測(cè)，無(wú)需進(jìn)行滅活。非重要細(xì)胞（預(yù)實(shí)驗(yàn)）或一次性實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，可以考慮用國(guó)產(chǎn)血清，但國(guó)產(chǎn)血清由于太臟，建議滅活后使用，56度，30分鐘，中間注意間斷地混勻培養(yǎng)基，防止有效成分被持續(xù)高溫破壞，使用前最好還是做一下無(wú)菌實(shí)驗(yàn)。使用國(guó)產(chǎn)血清，抗生素量可適當(dāng)加倍。血清一般分裝于-20度凍存，用多少拿多少，最好是4度緩慢融化，所以你要提前一天做好準(zhǔn)備。

4.胰酶：貼壁細(xì)胞培養(yǎng)一般需要胰酶消化，對(duì)某些半貼壁細(xì)胞，雖然protocol不建議用胰酶消化，但若是貼壁較牢，你硬是要用滴管吹，反而會(huì)對(duì)細(xì)胞早成更大的傷害。我們用的胰酶是用1640培養(yǎng)基配置的，濃度為0.5%，使用效果不錯(cuò)。關(guān)于消化的度的問(wèn)題，是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)來(lái)的，說(shuō)是看到細(xì)胞變圓，大部開(kāi)始脫落就可以終止了，但我覺(jué)得還是根據(jù)特定細(xì)胞來(lái)定。注意細(xì)胞消化千萬(wàn)不能過(guò)，以前養(yǎng)293細(xì)胞，消化過(guò)了會(huì)產(chǎn)生纖維狀的的絲，部分細(xì)胞聚在一起很難打散。胰酶消化前，細(xì)胞最好用PBS或Hank's液（我沒(méi)用過(guò)）稍微洗滌一下就好了，這樣很容易消化。如果偷懶，不洗也行，但消化較慢，因?yàn)闅埩舻难宄煞謺?huì)有一些中和。

5.細(xì)胞活力和增殖試：現(xiàn)在大家常用的是MTT法，很經(jīng)典。但是現(xiàn)在有更簡(jiǎn)單好用的方法，使用alamarBlue! 具體方法大家可以自己查，我知道深圳雅為生物開(kāi)發(fā)公司有改產(chǎn)品，其他代理我不太清楚。該法的優(yōu)點(diǎn)是染色后的細(xì)胞可以繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)或作其他實(shí)驗(yàn)，只需在檢測(cè)完更換一下培養(yǎng)基就好了。但可能實(shí)際較貴，25ml價(jià)格約1400元，一般使用量96孔板，20ul/孔。